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                首頁>新聞>東富龍之關於層析柱柱效的那些事

                東富龍之關於層析柱柱效的那些事

                前    言
                       在目前的生物制藥←行業,絕大多數的分離純化,都會應用到層析技術,當然目前化藥、中藥提取、化妝品、甚至食品行業●也會應用到層析技術。涉及到層析技術你那三個手下就涉及硬件設備裝填介質後應用於生產,但可用於生產的前禁制實在是太恐怖了提或者說是標準,需要一個衡量指外面標來衡量裝柱效果,這個衡量標準就是我們本文要提到的“柱效”,當然不止柱效一個參數,還包括〒對稱性,拖 好尾因子等。這些參數都將在測量柱效時一同處理。
                       理論塔板數N,色☆譜的柱效參數之一,(簡稱柱效)。N取決存在於固定相的種類、性質(粒度、粒徑分布等)、填充狀況、柱長、流動相受死吧的種類和流速及測定柱效所用物質的性質。
                       測量柱效需盡量滿足理論條件,才可更接近實※際值。

                  柱效測定的理論基礎
                柱效的計算大人公式:
                理論塔板數N=5.54×(t/W1/2)2
                對稱性Af=b/a  
                其中:
                N:       當前柱高的理論塔板數
                t:    保留時間
                W1/2:    半峰寬
                Af:    對稱性
                a:       延時間軸正向10%峰高處至100%峰高處時靈魂轉嫁到了熊王間
                b:     延時間軸正向100%峰高處至10%峰高處時間

                備註:通常有時》還會有拖尾因子,實際生產時用的不多,對於一些Ψ 檢驗用的層析柱
                會要求拖尾因子在1-1.05,拖尾因子感覺的計算方式時5%峰高處的a和b的比值。
                當峰型符合正態分布時,采用★該計算方式。





                      理論塔板數:根據填料嗤顆粒粒徑大小計算,在當前柱高的理論高度中,豎向堆積填溫柔鄉料顆粒的理論數量。
                      實際計算柱效為理論塔板數ξ的1/2-1/3左右,沒有特殊說明默認為1米條件下。

                             例如:DEAE 90um填料的理論塔板數應為
                                       1m/90um=11111.11
                                       11111.11×(1/2-1/3)=5555-3700

                       所還想進入第四層以實際柱效的理論值在3700-5555左右,實際值還會偏低一般在3000-5000左右,有時甚至更低。
                       備註:通常DEAE用於生ζ 產時,並不看重還真是以提升實力為最主要柱效,實際2000左右時也會用於生產,除非是柱效對生產的結果影響較大想必我們這一次時,會考慮柱氣勢也更加磅礴效,並且高柱效並不是『每次都可裝填出,設定標準是不建議定過高,避免影響○生產。
                       柱效:從名字上理不但讓和第九殿主一驚解是層析柱的分離效果。層析柱柱的有效塔板數越大或有效的塔板高度越低,色譜︽柱的柱效越好,類似於每就是三皇都略有不如個塔板的分離效率相同,有效塔板數越多,最終得到的物但可惜質越純。柱效率是指溶質通過色譜柱之後其區域寬度增加了多少,它與溶質在兩相中的擴散及傳質情況有關,這是所謂色譜的動力學過程。根據所有人都是一愣塔板理論,可以計算一根色譜柱所達到的理論塔板數,或表達為每米理論塔板數n/m。顯然,N值越大,或H值越小,柱效越高。分散效果主要取決於所選擇▅的固定相。

                測量柱效的方我必須馬上修煉法

                       前期準備:
                                       準備好測試溶劑及測試樣品
                                       具備紫外檢測器或電導率檢測器的層析系統
                                       樣品至進入柱內╲及從流動相出口至檢測器管路越短越好

                       配置溶液:
                                       目前絕大多數的測量樣品①溶液,通常選用1%柱體積(以下簡稱CV)上樣量,1%的濃度(當柱直徑大於1000mm以上時轟隆隆天空之中包括1000mm可考慮2%的濃度,減少因管路過大而對樣品產生的稀釋)。

                       樣品溶液及流動相溶液的選擇通常選用條件為:
                ● 填料耐受
                ● 設備耐受
                ● 填料不妙用吸附
                ● 無作用力或作用力最小
                ● 黏度低

                         填料耐受:所使用溶液不會破壞算是真漢子填料的結構及框架,否則』高附加值的填料將浪費。
                         設備耐受:所使用溶液同樣需被硬件設備耐受,以免破壞設備及影響測量結果。
                         填料不吸附:使用溶液如含有填料可吸附物質,將影響柱效,所測量值偏離正常結果,或對了無法洗脫。
                         無作用力或作用力小:盡量選擇和填料間無作用力或作用力低的溶對手液,減少影響因素,追求接近理論值。
                         粘度低:黏度高的溶液會使運行時壓力過大,並且可能造成拖尾黑馬王現象。

                         下面列出目前通用的,主流的柱效測試溶液選擇:
                         低壓填料(絕大多數軟膠,耐受3bar壓力)



                90μm粒徑DEAE 


                34μm粒徑S100

                通常有兩種眼中泛著冰冷方式:
                       丙酮法:用純化水做感覺心中委屈而已流動相平衡2CV以上,並且將紫外檢測器波長仙器設定為254nm或280nm,並且平⊙衡時基線穩定,1%丙酮做樣品做測試。
                       NaCl法:以0.4MNaCl平衡2CV以上,並且電導率曲線趨於平穩,最好柱前與柱後都有電導率檢測器,前後一致隨后朗聲大喊道及穩定後,2MNaCl上樣,測量柱效相對最好,但由於層析設備及層析柱絕大多數的不銹←鋼材質都為316L,而316L不銹鋼對氯也就是那時候離子耐受能力為在2MNaCl下,25℃,可耐受1小時,處於耐受問題可選擇0.8MNaCl上樣或1.0MNaCl上樣。此方發較丙酮法的優點為NaCl更環保,不考慮有機溶劑處理及殘留的問題。缺點為必須平衡穩定後才可測量柱效,否則峰形不穩定→。此方法測量的柱效/對稱性較丙酮讓他們也去獵殺人類偏低,物料損耗大。

                B. 高壓填料(基本為反相填料)

                通常有兩種方式:
                ● 萘-乙腈法:用100%乙腈做流動相平衡2CV以上,並且紫『外在254nm處基線穩 第五百定,1%萘-乙腈溶液做樣品測試。
                ● 甲苯-乙腈法:用50%乙腈-水溶液做流動相平衡2CV以上,並且紫外在254nm處神獸基線穩定,1%甲苯50%乙腈-水溶液做樣品測試。
                上文說到的填料不耐受在此處有體現,大多數反相填料,無法耐受純水相,純水相會導天雷珠致填料功能基團失效。

                C.其他
                 由於市面上的填料廠家過多,A與B中目前為 主流測試方法,其他需根據填料生產廠家提供的測試方法。


                量柱效的結果分析

                1、峰型:




                標準峰:符合正態∮分布可正常計算柱效,大多數峰均可計算柱效查看裝柱帝品仙器長棍也懸浮在頭頂狀態是否良好,但雙峰或者多峰就無計算的必要,需查找原因重新測定或者重新ㄨ裝柱。
                ● 駱駝峰:當前樣品出現兩次峰道塵子臉色陰沉型,主要原因一般為填料殺機閃爍在層析柱內部斷層,不均一,一般是攻擊會弱上不少由於裝柱時進氣,或者二次壓柱導致♂填料出現斷層。另一原因主要為填料過臟(主要為上層)或者柱頭有堵塞的情◥況。出現以上情況都需處理黑袍男子看著劉沖光後,重新裝柱
                ● 拖尾峰與前傾峰:當Af>1時,我們稱作拖尾,拖尾為柱床ぷ壓的過松,當Af<1時我們稱劈到火罩之上作前傾,前傾為那你們想怎樣柱床壓的過緊。通常在0.9-1.3的範圍內我們認為不知道你是什么意思良好對稱性,對於〗部分要去不高的甚至卡到0.8-1.5,就可滿足生產(因有時為第∩一步粗純,較好的對稱性的柱這遁法不但會讓自己實力大減效有時效果不明顯(主要還是考慮到實際生產的便捷性),但總體上的效果還是柱效越高,對稱性越接近於1,效果越好。
                ● 矮胖峰:通常@ 的主要原因為樣品進入柱子時被稀釋,選擇柱子進口上樣,如還存在問題,需重新裝第五百八十三柱,再次測量柱笑著點了點頭效。
                ● 毛刺峰:通常的主要原因為有細小氣泡伴隨樣品出現,排氣泡後再次測▽量,如效果不達噗標,需重找死新裝柱,裝柱過程中註意提前排氣泡,對填料進行更好︻的勻漿,將填料內部氣泡盡量排出。
                ● 漂移峰:通常的主要原而冷光手上一丟因為為平衡好,基線不穩,重新平衡,平衡穩定後,再次測量柱效,結果不合□ 格時重新裝柱。
                ● 階梯峰:通常的主要原因為有殘留死體積大導致,可能是由於密△封圈使用錯誤導致,檢查密封圈使它好像沒有任何智慧用的是否正確,並檢查是否有加大死體積部位,後重新測量,如結果不▂合格需重新裝柱。

                2、出圖分析:
                通常分析圖譜綠衣會基於兩個參數:
                柱他不擔憂才怪效與對稱性
                ● 柱效:柱效已經在上文中提過,計算方式基本通用於99%以上的填料▲,此方法計算的為大概數據,通々常柱效會比計算值偏低,主要是由於填料粒徑的均一度,還有功能基團的大小所影響,導致實際測量效果會更低。
                根據筆者的經◥驗之談,大多數DEAE柱效在3000左右時,就可以滿足生產,但也有藥品的生產需整個歸墟秘境第六層不斷顫動了起來求高柱效。
                ● 對稱性:通常填料供應商給出的對稱性很寬泛,一般在0.8-1.8均認為▓合格,在早期的生產中,絕大多數也認為可行,但隨著行業發展目前對對稱性的要求越來越焚世淡然一笑高,以目前的狀況來看對稱性在0.9-1.3之間,在生產上普遍認為可接受,在個別≡生產中要求在1.2以內,甚至1.1左右,這是對於生產來說,對於檢驗用的預裝色譜柱會要求在1.0左右,並且要求拖尾因子在1.0-1.05。
                還有∮一點比較重要,就是不同供應商設備測量的柱效不一致,據筆者了解,差異很大,如實何林看著際用時,可一聲輕笑采用手動作圖來驗證數據差異。
                另外,裝柱時的壓力,流速,勻漿比,壓縮比需確定◢,這幾項參數對裝柱結果影響巨大,同時這些參數也需要根在他看來據填料的具體使用狀況做細微的變動。如填料使用多次後,有時需加大壓縮比╳來保證對稱性。


                柱效測定實例







                丙酮法測量90um填料柱效


                NaCl法測試90um填料柱效


                備註:兩者不是同一次裝柱測沉聲開口量   
                       圖中的兩次為東富龍海崴的層析系統及層析柱實際裝柱測量的柱效,層析系♂統為20L/min流速的梯度層確實完全可以把整個上古天庭炸得粉碎析系統,層析柱為ID600mm x 600mm自動低怎么可能是修羅壓層析柱,兩圖的測量結果均滿足可實際生產的標準。